一、原理
在一定條件下，有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)系。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物（乙酰膽堿）水解。其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計測定吸光度隨時間的變化值，計算抑制率，通過抑制率可以判斷出樣品是否含有有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。
二、應(yīng)用儀器
三、分析步驟
1、樣品處理
選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取樣品1g，放入燒杯或提取瓶中，加5ml緩沖液，震蕩1~2min，倒出提取液，靜止3~5min待用。
2、測定
對照溶液測定：先于試管中加入2..5mi緩沖液，再加入0.1ml酶液，0.1ml顯色劑，搖勻后于37℃放置15min以上（每批樣品的控制時間應(yīng)一致）。加入0.1ml底物，此時溶液開始顯色反應(yīng)，應(yīng)立即放入儀器比色池中，記錄反應(yīng)3分鐘的吸光度變化值ΔA0
樣品測試：先于試管中加入2..5ml樣品提取液，其它操作與對照溶液測試相同，記錄反應(yīng)3分鐘的吸光度變化值ΔAt
3、結(jié)果計算
抑制率%＝［(ΔA0-ΔAt)/ ΔA0］×100%
式中：ΔA0--------對照溶液反應(yīng)3min吸光值的變化值；
ΔAt-------樣品溶液反應(yīng)3min吸光值的變化值；
4、結(jié)果判定
當(dāng)蔬菜樣品提取液對酶的抑制率≥50%時，表示蔬菜中有有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在。抑制率≥50%的樣品需重復(fù)檢驗2次以上。
對抑制率≥50%的樣品，可用其它方法進一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。
應(yīng)用流程圖如下：
