1、液相色譜柱的活化
對于液相色譜柱而言，每根色譜柱在裝運之前都經(jīng)過了測試，并存放在測試洗脫液中進行運輸。因此在首次使用時，反相柱建議80%的甲醇使用檢測樣品1/2的流速沖洗4小時，再用流動相徹底地平衡色譜柱即可進樣分析。如果使用流動相添加劑（如緩沖液或離子對試劑），建議使用含原有比例但不含這些添加劑的流動相進行中間過渡10至20個色譜柱體積再更換成分析樣品流動相。對于具有較短化學(xué)鏈（例如C8、苯基、CN）鍵合相的色譜柱，應(yīng)小心確保在使用色譜柱之前對其進行徹底的平衡。這樣可確保重復(fù)性，并有助于防止保留時間的漂移。
正相溶劑和反相溶劑是不互溶的，這一點不能忽略。對于新購柱子，首先請注意打開分析測試說明書，了解柱子的保存溶劑。如果保存溶劑與你將要使用的流動相不互溶，請先用異丙醇過渡。過渡過程中注意因異丙醇粘度較大，會導(dǎo)致柱壓升高，適當(dāng)調(diào)低流速。如果流動相中含有緩沖鹽類，先用不含緩沖鹽的同比例流動相過渡，避免緩沖鹽的析出。
2、C18色譜柱的活化
C18色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，是中國藥典特征譜圖唯一指定的色譜柱，也是最常用的液相色譜柱之一。對于拿到一根新C18柱的時候應(yīng)該怎樣進行活化及維護呢？
新柱活化，實際上是一個平衡的過程，色譜柱在運輸和儲存過程中，有可能出現(xiàn)柱內(nèi)溶劑揮發(fā)的情況，導(dǎo)致填料干掉，鍵合相得不到充分潤濕，因此需要活化。按照廠家色譜柱說明書的操作進行活化即可。除了用流動相平衡外，有時候還必須用所測樣品對新柱進行平衡，具體平衡方式也很簡單，把前面用來平衡的進樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成，連續(xù)進樣多針。用待測物對新柱平衡，目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點的吸附能力飽和掉。
C18柱會用甲醇從小流量到大流量慢慢活化，因為低流速的甲醇可以很好的浸潤固定相，使鍵合相很好的伸展，用溶劑平衡好系統(tǒng)后，可以采取多次進樣或者加大進樣量的方式以更快的獲得重現(xiàn)的色譜圖，這樣用樣品將色譜柱中的活性位點飽和，就不會出現(xiàn)異常色譜現(xiàn)象的情況。
